上海茁彩生物科技有限公司
初级会员 | 第4年

86-021-65681082

当前位置:上海茁彩生物科技有限公司>>外包服务>>real-time PCR>> 茁彩生物real-time PCR

real-time PCR

参  考  价面议
具体成交价以合同协议为准

产品型号茁彩生物

品       牌

厂商性质0

所  在  地上海

更新时间:2022-08-12 11:21:41浏览次数:139次

联系我时,请告知来自 化工机械设备网
同类优质产品更多>
外包服务
脂肪酸组分 氨基酸组分 农药残留 理化性质 植物元素 养分检测 生化 透射电镜全套 WB(核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白) 引物合成 real-time PCR 树脂包埋(透射电镜) WB(普通蛋白,磷酸化蛋白)) 免疫荧光(双标) 免疫荧光(单标) 原位杂交(绿色荧光单标) 原位杂交(DAB显色) 原位杂交(红色荧光单标) 超薄切片(透射电镜) [免疫荧光/IF] - FJB染色 [动物实验] - 蛋白质组学服务 激光共聚焦拍照 TUNEL(荧光) micRNA检测 普通PCR 生化检测 HPLC检测系列 琼脂包埋 普鲁士蓝染色 PASM 六胺银染色 骨组织脱钙(人、兔、猪等) 阿利新蓝染色 冰冻切片 油红O染色 骨组织脱钙(普通、小鼠、大鼠) 天狼猩红染色 细胞石蜡包埋 甲苯胺蓝染色 masson染色 HE染色 LFB髓鞘染色 瑞士吉姆萨染色 尼氏染色 肥大细胞染色 kuweisuan品红VG染色 刚果红染色 快速革兰氏染色 茜素红染色 PAS-萘酚磺S染色 Trap染色 β-半乳糖苷酶染色 ATP染色 ALP碱性磷酸酶染色 ROS活性氧检测 movat五色染色 高尔基染色 多层扫描(高尔基染色片) OCT包埋 番红-固绿染色(软骨) 亚甲基蓝染色 普通切片扫描 组织芯片制作 石蜡切片 植物标本软化(普通根、茎) 植物标本软化(种子、硬枝) 苯胺蓝染色 组织石蜡包埋 番红-固绿染色(植物) PAS糖原染色 EVG染色 半薄切片 组织芯片切片 锇酸染色 麦胚凝集素(WGA)荧光染色 TTC染色(梗死) AB-PAS染色
real-time PCR:定量PCR1)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系,每个反转录产物配制3管。2× qPCR Mix 12.5μl7.5μM基因引物 2.0μl反转录产物 2.5μlddH2O 8.0μl2)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系,每个反转录产物配制3管。

real-time PCR

价格:120元

荧光定量PCR实验步骤:

1、总RNA抽提(枪头和离心管均经过湿热灭菌,无RNA酶)

1)取匀浆器,加入1ml的Trizol Reagent,置冰上预冷。

2)取100mg组织,加入到匀浆器中。

3)充分研磨直至无可见组织块。

4)13000g离心10min取上清。

5)加入250 μl,颠倒离心管15s,充分混匀,静置3min。

6)4℃下13000g离心8min。

7)将上清转移到一新的离心管中,加入0.8倍体积的异丙醇,颠倒混匀。

8)-20℃放置15min。

9)4℃下13000g离心10min,管底的白色沉淀即为RNA。

10)吸除液体,加入75%乙醇1.5ml洗涤沉淀。

11)4℃下13000g离心5min。

12)将液体吸除干净,将离心管置于超净台上吹3min。

13)加入20μl无RNA酶的水溶解RNA。

14)55℃孵育5min。

 

2、反转录(枪头和PCR均经过湿热灭菌,无RNA酶)

1)取一PCR管,加入含2μg RNA的溶液。

2)加入1μl oligo(dT)15。

3)用无核糖核酸酶的去离子水补足至12μl。

4)于PCR仪上70℃保温5min,迅速置冰上冷却。

5)依次加入4μl 5×buffer,2μl 10mM dNTPs,1μl RNA inhibitor和1μl 反转录酶,用枪抽吸混匀。

6)于PCR仪上42℃保温60min,结束后80℃保温5min灭活反转录酶。

 

3、定量PCR1)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系,每个反转录产物配制3管。2× qPCR Mix 12.5μl7.5μM基因引物 2.0μl反转录产物 2.5μlddH2O 8.0μl2)取0.2ml PCR管,配制如下反应体系,每个反转录产物配制3管。2×qPCR Mix 12.5μl7.5μM内参引物 2.0μl反转录产物 2.5μlddH2O 8.0μl3)PCR扩增预变性 95℃,10min循环(40次) 95℃,15s→60℃,60s溶解曲线 75℃→95℃,每20s升温1℃4、结果处理ΔΔCT法:A=CT(目的基因,待测样本)- CT(内标基因,待测样本)B=CT(目的基因,对照样本)- CT(内标基因,对照样本)K=A-B表达倍数=2-K

会员登录

×

请输入账号

请输入密码

=

请输验证码

收藏该商铺

X
该信息已收藏!
标签:
保存成功

(空格分隔,最多3个,单个标签最多10个字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~
拨打电话
在线留言