液相色谱测定氯地霜中*和醋酸*的含量

氯地霜是以*和醋酸*为主药，以硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、硬石蜡、凡士林、液体石蜡、甘油、三乙醇胺、尼泊金乙酯等为基质的乳剂型基质乳膏，临床上主要用于皮炎、湿疹、脂溢性皮炎、痤疮等症，效果良好。由于组分含量差别悬殊，基质成分干扰严重，紫外分光光度法［1］很难进行分离和测定，双波长等［2～4］计算分光光度法测定又存在霜剂基质成分复杂，组分质量时有差异，测定结果误差较大的问题。本文经过实验研究，选用了专属性较强的HPLC方法测定乳剂中*和醋酸*的含量，获得了比较理想的结果。
1　仪器与试药
　　STI5000型液相色谱/泵、UV5000型紫外检测器/。
*、醋酸*对照品均购自中国药品生物制品检定所；氯地霜样品及空白基质由柳州市皮防站提供；甲醇为AR级。
2　色谱条件
　　色谱柱：PE-C18（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：甲醇-水（70∶30），流速：0.5mL.min-1；检测波长：240 nm；灵敏度：0.0UFS；纸速：8 mm.min-1。
3　对照品贮备溶液的制备
　　精密称取*和醋酸*对照品适量，用甲醇溶解并稀释成含量分别为20 mg.mL-1和0.25mg.mL-1的混合溶液，摇匀。
4　系统适用性试验
　　精密量取对照品贮备液2.5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在选定的色谱条件下，精密量取对照品溶液5μL进样，色谱图见图1-A，*和醋酸*的保留时间分别为3.90、10.68min；理论板数分别为2455、3950；二者的分离度为13.6。
氯地霜样品预实验发现：在*和醋酸*拖尾峰（tailingpeak）。前者少见。>色谱峰之间，比对照品色谱图多1个色谱峰，为基质中易溶于醇的尼泊金乙酯峰［5］，保留时间为5.53min，见图1-B。该尼泊金乙酯峰与*的分离度为5.1，与醋酸*的分离度为10.3。此结果表明：在本文选定的色谱条件下，柱效和各峰之间的分离度均达到了实验要求。
图1　*和醋酸*（A）及其乳膏（B）、基质（C）的色谱图
1.*　2.醋酸*　3.尼泊金乙酯
5　线性试验
　　精密量取对照品贮备溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于50mL量瓶中，用甲醇稀释定容，在上述色谱条件下，分别进样5 μL，记录基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面积。以组分峰面积X对浓度Y回归，得*及醋酸*的线性回归方程分别为：
Y=5.1657+1.6568×10-4X　r=0.9997
Y=1.1605×10-1+4.7525×10-5X　r=0.9998
线性范围分别为600.0～1400.0、7.5～17.5 μg.mL-1。
6　样品测定
　　取本品适量（约相当于*50 mg，醋酸*0.625 mg），精密称定，置小烧杯中，加甲醇适量，置80 ℃水浴中加热2min，如此反复提取3次，放冷，过滤至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，置水浴中冷却2h以上，取出后迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。取含*1 mg.mL-1、醋酸*12.5μg.mL-1的对照品溶液和样品溶液各5 μL，分别注入液相色谱仪/，记录峰面积，外标法计算2种成分在乳膏中的含量，
7　加样回收试验
精密称取已知含量的乳膏样品适量（约相当于*50 mg、醋酸*0.625 mg），分别精密加*对照品40、50、60mg；醋酸*对照液（0.25 mg.mL-1）2.0、2.5、3.0 mL，按样品含量测定项下方法提取，置100mL量瓶中，并依法进行色谱测定，计算回收率，结果见表2
表2　回收率测定结果（n=5）