HPLC法测定头孢克罗分散片的含量

摘要　　报道了头孢克罗分散片中头孢克罗的反相液相色谱法，采用ODS柱（250 mm×4.6 mm），水—3.86%醋酸钠溶液—甲醇（1380∶29∶591）为流动相，乙酰苯胺为内标，用紫外检测器于254 nm波长处检测。平均回收率为99.83%，RSD＝0.72 %（n=5），线性范围为0.1～0.5 mg/mL（r＝0.9996）。检测限为1.6×10-4μg。本法具有快速、简便、灵敏、准确等优点。
关键词：反相液相色谱法　头孢克罗
　　头孢克罗具有抗菌谱广，抗菌活性强等特点。其原料及制剂在我国已有生产和使用。原料和制剂的含量测定方法已见报道，有羟胺法［1］、液相色谱法/［2，3］、微生物效价测定法［4］。本文采用RP—液相色谱法，以内标法测定头孢克罗分散片的含量，操作简便快捷，结果准确可靠。辅料及杂质降解物不干扰测定。
1　仪器和试剂液相色谱仪/UV5000型，UV5000检测器，；头孢克罗对照品（含量99.53%）、头孢克罗分散片均由安徽省新药研究院提供；乙酰苯胺由中国药品生物制品检定所提供；其它试剂均为分析纯。
对照品溶液的制备：取头孢克罗对照品约60 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
内标物溶液的制备：取乙酰苯胺约30 mg，置100 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，用流动相稀释至刻度。
2　色谱条件
色谱/柱：Irregular-H C18（10 μm）250mm×4.6 mm，流动相：水—3.86 %醋酸钠溶液—甲醇（1380∶29∶591），流速为0.8 mL/min，检测波长为254nm，灵敏度为1.0 AUFS，进样10 μL。
3　线性关系
取头孢克罗对照品50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，使之成为1.0mg/mL的溶液。精密量取此溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分置5只10mL容量瓶中，再分别加入前述内标物溶液各4.0 mL，加水稀释至刻度。分别取10μL注入色谱仪。记录色谱图。以头孢克罗对照品的浓度C（mg/mL）为横坐标，以头孢克罗对照品基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面积与内标物峰面积的比值A为纵坐标，求得回归方程（n=5）：
A＝3.152C-0.11142　r＝0.9996
表明在0.10～0.50 mg/mL的浓度范围内，线性关系良好。
4　精密度试验
分别取前述对照品溶液5.0 mL和内标物溶液4.0 mL置10 mL容量瓶中，加水至刻度，使之成为含头孢克罗0.3mg/mL的溶液。分别在日内、日间（5d内）连续进样，以内标物峰面积与对照品峰面积之比值计算RSD（n=5）。日内RSD=0.701%；日间RSD=1.09 %。
5　加样回收试验
精密称取已知头孢克罗含量的同一批样品3份，分别加入精密称定的头孢克罗对照品适量，按相当于头孢克罗60mg取样，照样品测定项下方法测定，计算回收率。
6        方法专属性试验
6.1　辅料的色谱行为　经实验，辅料无吸收峰，对头孢克罗的测定不产生干扰。
6.2　内标物对头孢克罗吸收峰的影响　内标物的保留时间约13.3 min，头孢克罗的保留时间约5.5min，两者峰形及分离度良好
对照品（A）与样品（B）色谱图
1.头孢克罗　2.乙酰苯胺
6.3        杂质及降解物对含量测定的影响　正常的样品中未见杂质吸收峰。把样品经以下处理：将头孢克罗分别以0.1 mol/L盐酸溶液、0.1mol/L氢氧化钠溶液和水各制成0.5 mg/mL的溶液，于80 ℃加热24 h，进样10μL，得其破坏性图谱（图2）。各降解产物对头孢克罗的定量无影响。
头孢克罗经酸、碱、水处理后的色谱图
A.0.1 mol/L盐酸
B.0.1 mol/L氢氧化钠溶液　C.水
7        样品测定
取头孢克罗分散片10片，精密称定，研细，精密称取适量（相当于头孢克罗60 mg），置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。过滤，精密量取续滤液5.0 mL至10 mL容量瓶，精密加入内标溶液4.0mL，加水至刻度。另取头孢克罗对照品60 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。取对照液5.0 mL至10mL容量瓶，加入内标物溶液4.0 mL，加水至刻度。
分别取上述溶液10 μL注入色谱仪，按内标法计算含量。
按上述方法对3批头孢克罗分散片的含量进行了测定。每批样品测定3次。实验结果见表2；样品色谱图见图1—B。