植物树叶总蛋白组织样品处理方法

     植物树叶总蛋白组织样品处理方法

      对多数从动物或植物组织里提取总蛋白质而言，同样没有一种通用的程序。但遵循的原则基本相同。下面列出两种提取植物树叶总蛋白程序：

裂解液制备：

（A）,7M Urea,2M Thiourea,4%(w/v)CHAPS,40mM Tris-Base,40mM DTT,2%Pharmalyte pH3-10.

（B）,905M Urea, 2%(w/v)CHAPS, 0.8%(w/v)Pharmalyte pH3-10,1%(w/v)DTT and 5mM Pefabloc proteinase inhibitor;

三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物树叶总蛋白程序：

1. 先将植物树叶置于液氮中速冻，后放置于Gd200组织研磨仪中研碎；
2. 悬浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巯基乙醇的丙酮溶液，-20℃冰浴；
3. 让蛋白质沉淀过夜然后离心（4℃，40，000g,1h）,弃上清液；
4. 重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的冰预冷丙酮溶液里；
5. 离心（4℃，40，000g,1h）后真空干燥沉淀；
6. 用（A）或（B）裂解溶液溶解沉淀，离心（4℃，40，000g,1h）；
7. Brandford法定量蛋白，然后分装保存在-78℃备用

超速离心法：

1. 取材；
2. 用Gd200组织研磨仪在液氮冷冻条件下将样品研成粉末，每1g样品加入0.5ml裂解液，使用Gd200高通量组织研磨仪研磨匀浆30s；
3. 组织悬液15℃，10,000×g离心10min；
4. 上清液4℃，150,000×g超速离心45min；
5. 小心避开上层漂浮的脂质层，吸取离心上清6℃40,000g再次离心50min;
6. 取离心上清。Brandford法定量蛋白，分装后置-75℃保存。