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(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的。因此, 增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在 520nm 测定吸光度。
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。
1、细胞、细菌或组织样品的制备 :
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每 100 万细菌或细胞加入 1mL 提取液, 超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),之后置沸水浴振荡提取 10min;10000g,常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取 10min,10000g, 常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:取 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取
10 分钟,10000g,常温离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。
3、标准品的处理:称取 1mg,将标准品稀释为 15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
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