鸭AKT蛋白（AKT）ELISA试剂盒 返回列表页

中文名称：鸭AKT蛋白(AKT)ELISA试剂盒

鸭AKT蛋白(AKT)ELISA试剂盒检测样本：血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆及相关生物液体

血清：不含抗凝剂的/含促凝剂。（通常为红色、黄色、橘色管盖的）

血浆：含抗凝剂。（通常为绿色、紫色管盖的 ）

样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。

细胞样本裂解方案

贴壁细胞裂解方法

单层贴壁细胞总蛋白的提取：

1、倒掉培养液。

2、每瓶细胞加5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。

3、按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）

4、每瓶细胞加400 μ 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。

5、裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。（整个操作尽量在冰上进行。）

6、于4℃下12000rpm离心5min。（提前开离心机预冷）

7、将离心后的上清分装转移倒0.5min的离心管中放于－20℃保存。

悬浮细胞裂解方法

 1. 培养1×106-1×107个细胞；

 2. 将细胞转移到15ml圆形离心管，4?C, 500g离心5min；

 3. 小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4?C, 500g离心5min； 

 4. 尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

 5. 在上步骤获取的细胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。

 6. 吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；

 7. 将所有细胞转移到1.5ml离心管；

 8. 4?C, 14000g（离心机大转速）离心10min；

 9. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80?C。

 10. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer。

可选步骤：

   建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。