冻干新鲜补体豚鼠血清的正确运用

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 补体结合试验(complement fixation test，CFT)该试验是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统，来检测未知的抗原或抗体的血清学试验。有五种成分参与，分为指示系统和待检系统(已知抗原和未知抗体或已知抗体和未知抗原)。补体用新鲜豚鼠血清。方法是将已知的抗原或抗体与未知标本(可能含相应抗体或抗原)充分混合，再加入补体作用一段时间，后加入指示系统。若待检系统有相应抗体或抗原，则能形成抗原抗体复合物，从而消耗了补体不出现溶血现象，此为阳性；相反，出现溶血则为阴性。补体结合试验的影响因素较多，正式试验前需对已知成分作一系列滴定，尤其是补体，应选择适宜的量参与反应，避免假性结果。每次试验尚需同时设立多种对照，以作为判断结果可靠性的依据。该法对颗粒性或可溶性抗原均适用，临床上常用于检测某些病毒、立克次氏体和螺旋体感染者血清内的中的抗体，亦可用于某些病毒的分型。

补体结合，利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验。首先将经过56℃处理30分钟使补体灭活的抗血清，与抗原及补体（通常将豚鼠血清作适当稀释后使用）混合使起反应。第二是加入已同抗绵羊红细胞抗体相结合的绵羊红细胞（致敏红细胞）。在初阶段对消耗补体建立起足够的抗原抗体反应时，没有发生致敏红细胞的溶血，但补体剩余下来则引起溶血反应。

 

一、血清制备 由于豚鼠血清中，含有对人精有毒性的物质，因此用作补体的豚鼠血清，应在合并之前逐只检查，仅把无精制动作用的豚鼠血清合并，用溶血反应测定血清的补体效价(C'H)，以无精制动作用的未婚女性血清，调整补体效价为 200C'H 左右，确保制动反应系统有足够的补体量(10C'H)参与。豚鼠血清以 0.5mL 分装于小试管内，置 - 70℃保存备用。　

(1) 作补体用的豚鼠血清制备：一次用10-15只豚鼠，分别从心脏采血，低温下分离血清，分别以精制动试验检测对人精有无毒性，具体方法如下。

　① 试验组：　处女血清 0.25mL　精悬浮液(40×106/mL) 0.025mL} 32℃/60min精活动率(T% )　待检豚鼠血清 0.05mL

　② 对照组：　处女血清 0.25mL　精悬浮液(40×106/mL) 0.025mL } 32℃/60min 精活动率(C%)　灭活豚鼠血清(或不加豚鼠血清) 0.05mL　两者比较 C/T≥1.2 判为有毒性，<1.2 判为无毒性。　把 1.2以下的豚鼠血清合并后，再测补体效价。　此外有人用 AB 血型的人血清作补体，不过 AB 血型人血清的补体效价比豚鼠血清要低得多，反应系统加入 0.05mL 血清仍不能充分把制动抗体检出，因此一般不采用。　

二、精洗涤 精采用丈夫或他人的都可以，都能取得相同的结果。但由于不孕妇女血中的精制动抗体多数是由精浆抗原所产生的抗体，精浆有中和抗体的作用，会影响测定的结果。所以制备精悬液时，首先要用 10% 家兔灭活血清洗涤精，尽可能把精浆成分除去，以免降低精制动抗体的效价。

 冻干新鲜补体豚鼠血清的正确运用