信帆生物细说：T细胞亚群检测试剂盒的样本制备方法以及操作步骤

 

信帆生物供应T 细胞亚群检测试剂盒，可以用于检测CD3,CD4,CD8,试剂盒配抗体，试剂盒操作简单，资料稳定，深受广大用户青睐，欢迎大家咨询！

 

T 细胞亚群检测试剂盒说明书

一：试剂盒组成：

 

1.防脱片剂 2ml

2.固定液 10ml

3.A 小鼠抗人 CD3 单抗 1ml

B 小鼠抗人 CD4 单抗 1ml

C 小鼠抗人 CD8 单抗 1ml

4.生物素标记羊抗小鼠 IgG（ IgG/Bio） 1.5ml × 2

5.碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2

6.A 底物增强剂（40×)200μl

B 底物液（40×) 200μl

C 底物缓冲液（10×) 800μl

7.细胞核复染液 5ml

8.封片剂 1ml

9.记号笔 1 支

10.PBS 2 包(1000ml)

二：标本制备：

取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血 1～2ml，PBS 稀释 1-2 倍后，沿装有等量淋巴

细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000

转/分）15-20 分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加 5 倍 PBS，离心（1000

转/分）5 分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流

液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴 30μl 细胞悬液于载玻片上，

静置 2 分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或 37℃温箱 1 小时

烤干。或用 PBS 将单个核细胞调至 2×105个/ml，离心涂片机 1000 转离心 1-2

分钟制片，快速吹干或 37℃温箱 1 小时烤干。涂片前取防脱片剂 5-10μl 均匀

推片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以

防掉片。

三：显色剂的配制：

分别取 A 液 25ul，B 液 25ul 置于干净试管中混匀，室温放置 2-5 分钟，加 1ml

蒸馏水，混匀，再加 C 液 100ul 待用。

*使用前，根据所需显色剂用量，按照以上比例现配现用。

四：标本染色：

1. 充分干燥（室温 2 小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画

圈，然后滴加固定液 50μl，室温静置 2-3 分钟，用 PBS 淋洗，擦干玻片背面及

细胞外的 PBS。

*以下反应均需在湿盒中进行。

2. 分别滴加抗人 CD3、CD4、CD8 单抗适量(10-30μl）,4℃过夜，PBS 淋洗 3 次。

3. 滴加生物素标记抗小鼠 IgG 适量（10-30μl），37℃孵育 30-45 分钟，PBS

淋洗 3 次。

4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育 30-45 分钟，PBS

淋洗 3 次。

5. 滴加显色剂 30-50μl，室温显色 20-40 分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜

上出现红色标记物时，用 PBS 淋洗。

6. 滴加细胞核复染液 30-50μl，30 秒后自来水淋洗。

7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。

五：观察：

高倍镜下选取染色好的视野记数 100-200 个单个核细胞，细胞表面有红色标记物

为阳性细胞。算出阳性率。

六：正常参考值：

正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，

20-30%；CD4/CD8 的比值在 1.5-2.0 范围内。

七：储存条件及有效期：

2-8℃保存，禁止冷冻，有效期为 12 个月。有效期内可在 0-25℃范围内七天短

时运输。使用时应及时及拿及用，使用后应立即放回冰箱。生产日期，使用期限

或失效日期见标签。

八：注意事项：

1. 免疫细胞化学检测是一种包含多步骤的检测方法，试剂的选择、样本的处理、

涂片的制备、染色及其结果的判读均需要进行专业的培训。

2. 任何阳性或阴性的解读，应由病理科医生结合病理形态学，临床表现及其它

检测方法进行，不作为单独的诊断指标。

3. 复染过度或不足都可能影响结果的判读。

4. 阴性结果表示未检出抗原，不一定表示样本中无该抗原存在，待测抗原编码

基因变异，抗原低表达或抗原修复不当等，都会造成抗原无法检出。

5. 本试剂仅对经处理的人外周血细胞进行验证，不做其他用途

6. 试剂盒使用中，应有适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。

 

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