竞争抑制ELISA对小分子定量检测的优势

通常意义上来说，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道尔顿（Dalton，Da）。在生物学领域，常见的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及医学检测中的激素等。

由于小分子通常化学组分单一，化学结构简单且分子量小，所以不具备免 疫原的基本化学特性。因此，小分子直接免疫动物是不能激发免疫应答而获得 特异性抗体的，常用的免疫学检测方法也很难对其进行定量检测。现有的针对 小分子定量检测的方法主要为液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC），但是该方法对仪器设备及样本性质要求高，检测耗 时较长，因此在一定程度上限制了小分子检测的发展。

正由于市场需求与现有检测方法的限制性不能达到统一，所以针对小分子 的检测，我公司基于*的小分子结构改造及偶联技术，研发了一系列的 ELISA 检测试剂盒产品。我们首先通过对小分子结构进行分析，然后针对性地对其进 行修饰并与特定的蛋白或多糖载体偶联，以获取具有免疫原性的*抗原，此 后再用该抗原免疫动物制备并筛选特异性抗体。由于小分子结构简单，分子量 小，不具有两个抗原识别位点，因此不能被两种抗体同时识别，所以在建立 ELISA 方法的时候很难使用双抗体夹心法。我们在获得小分子偶联物和特异性 抗体后，选用了竞争抑制法来建立 ELISA 的检测。

ELISA 检测法每次实验耗时约 2.5 小时，如果每次实验使用一个 96 孔酶标 板，除去标准曲线使用的 6 个孔，剩余 90 孔均可用于样本检测，所以对于每个 样本的检测仅需要不到 2 分钟。对小分子的定量检测，ELISA 检测法与常用的 HPLC 检测比较，其优势见下表。

表 1. HPLC 与 ELISA 定量检测小分子对比