产品展厅收藏该商铺

您好 登录 注册

当前位置:
上海古朵生物科技有限公司>资料下载>酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)注意事项

资料下载

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)注意事项

阅读:67          发布时间:2021-9-24
提 供 商 上海古朵生物科技有限公司 资料大小 19.1KB
资料图片 下载次数 6次
资料类型 WORD 文档 浏览次数 67次
免费下载 点击下载    

中文名称:酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
规格:2×50ml
分类:酶类染色
储存方式:4℃,避光,6个月
产品用途:细胞和组织的酸性磷酸酶染色
注意事项:主要由萘酚、六氮化对品红、亚硝酸钠等组成,染色后酶活性部位呈红色。

产品简介:
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI 为底物,在酸性pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等,亦可用于石蜡切片。

自备材料:
1、 蒸馏水、恒温箱
2、 载玻片、推玻片
3、 光学显微镜

操作步骤 (仅供参考):
(一)血液、细胞涂片:
1、 推片:取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上,推玻片于载玻片保持30度,置于血液或细胞滴液
的正前方,稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳
向前滑动至铺满血膜为止。
2、 自然晾干,ACP固定液4°C固定30s~3min,多数情况下30~60s即可。
3、 水洗,稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入ACP 孵育液,置于37°C温箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、 复染:苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2~3min。
6、 水洗、晾干、镜检。

(二)冰冻切片:
1、 冰冻切片回温至37°C,水中浸泡1~2min。
2、 自然晾干,ACP固定液4°C固定1~3min。
3、 水洗,稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入ACP孵育液,置于37°C温箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、 复染:苏木素染色液染色5~8min或甲基绿染色液染色2~3min。
6、 水洗、晾干、镜检。

(三)石蜡切片:
1、 石蜡切片脱蜡5~10min,重复一次。
2、 无水乙醇5min,90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、 水洗2min。
4、 自然晾干,ACP 固定液4°C固定30s~3min,多数情况下30~60s即可。
5、 水洗,稍微晾干(不易过分干燥)。
6、 切片入ACP 孵育液,置于37°C温箱,浸染45~60min,水洗。
7、 复染:苏木素染色液染色5~8min或甲基绿染色液染色2~3min。
8、 水洗、晾干、镜检。

染色结果:
阳性颗粒 紫红色
细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

临床意义:
1、白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性,且不被酒石酸抑制。
2、急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性,原淋巴细胞呈弱阳性,原粒细胞对ACP反应不一。
3、T淋巴细胞ACP染色呈阳性,颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、戈谢细胞呈强阳性,尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

注意事项:
1、ACP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色
2、对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
3、样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。
4、组织固定需在4°C冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。
5、组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56°C。应使用熔点为52~54°C的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。
6、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

收藏该商铺

登录 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~
二维码 意见反馈

扫一扫访问手机商铺
在线留言