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碱性磷酸酶-PAS联合染色液用途

阅读:59          发布时间:2021-9-7
提 供 商 上海古朵生物科技有限公司 资料大小 17.3KB
资料图片 下载次数 31次
资料类型 WORD 文档 浏览次数 59次
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中文名称:碱性磷酸酶-PAS联合染色液
规格:6×50ml
分类:酶类染色
储存方式:4℃,避光,6个月
用途:碱性磷酸酶染色与过碘酸雪夫试剂合用,同时显色碱性磷酸酶和PAS阳性物质。
注意事项:适用于冰冻切片、石蜡切片,碱性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS阳性物质呈紫红色。染色过程中注意控制过碘酸处理的时间,否则容易褪色。

简介:碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。ALP-PAS联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质,亦能区分二者。冰冻切片及石蜡切片均可。

操作步骤:
1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水,冰冻切片直接入水。
2、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内4℃固定。
3、切片入ALP孵育液(阴性对照切片入ALP对照液),置于37℃温箱。
4、入硝酸钴溶液,置于37℃温箱染色5min。流水洗5min后入蒸馏水。
5、上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育。
6、流水洗10min后入蒸馏水。
7、入高碘酸溶液,室温氧化。蒸馏水换洗3次。
8、入Schiff试剂,置于37℃温箱染色。
9、按亚硫酸溶液:蒸馏水=3:1的比例配制亚硫酸工作液,清洗3次,每次2min,入蒸馏水。
10、冰冻切片直接用甘油明胶封片,石蜡切片脱水。常规透明,中性树胶封片。

染色结果:
碱性磷酸酶活性部位   黑色
PAS阳性物质   紫红色

注意事项:
1、本染色液适用于冰冻切片、石蜡切片。染色过程中注意控制高碘酸处理的时间,否则容易褪色。
2、碱性磷酸酶显色后,经高碘酸应特别小心,严格控制时间,否则褪色。
3、ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分储存,一经开启立即使用。
4、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
5、对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

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